這個問題是常見的問題，就是一個PCR實驗一直都做得很好，停一段時間后再做就不行了。一通亂找原因后還是不行，很痛苦！

找問題要從大到小：

1、PCR擴增體系問題
用其他正在進行的且擴增正常的模板和引物證明PCR擴增體系沒有問題，即PCR反應(yīng)混合物、水、取液器、PCR儀、操作等都是好的（陽性對照）

2、引物問題
用以前擴增產(chǎn)物做模板（稀釋50倍），證明引物沒有問題

3、只是模板問題了。
因為樣本降解的可能性比引物降解的可能性高得多。也可能是樣本中的抑制物過多（新鮮時沒有溶出來）。

不要靠運氣找問題，先做*條很重要。亂找問題常常讓人失去信心的。